Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑聚焦

說(shuō)到轉(zhuǎn)染，invitrogen認(rèn)**，沒(méi)人敢認(rèn)**。Invitrogen一直保持著轉(zhuǎn)染市場(chǎng)的**地位，近幾年該公司又推出了一系列新產(chǎn)品。此文概述了幾種Invitrogen轉(zhuǎn)染試劑盒的特性和用途，以供參考。

高效轉(zhuǎn)染RNA——Lipofectamine? RNAiMAX

從初的sirna到如今的miRNA，隨著小分子RNA研究的持續(xù)升溫，研究人員也急需一種高效的RNA轉(zhuǎn)染試劑。于是，Invitrogen推出了Lipofectamine? RNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑。它是一款RNAi特異的陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑，可以高效地將小分子RNA導(dǎo)入多種細(xì)胞類(lèi)型。

Lipofectamine? RNAiMAX 轉(zhuǎn)染試劑可以在10倍的濃度范圍內(nèi)獲得大的干擾效果以及**的細(xì)胞存活率，這個(gè)特點(diǎn)使得Lipofectamine? RNAMAX的轉(zhuǎn)染條件極易優(yōu)化，以便在實(shí)驗(yàn)中使用低的siRNA濃度，從而降低細(xì)胞毒性。盡管Lipofectamine? RNAiMAX的說(shuō)明書(shū)建議以10nM siRNA 作為優(yōu)化干擾效果的起始濃度，但是僅用1nM siRNA 也可以獲得較好的靶基因干擾效果。不過(guò)，這款試劑只能用于小RNA的轉(zhuǎn)染，不能用于共轉(zhuǎn)染。如果需要共轉(zhuǎn)染，只能借助經(jīng)典的Lipo 2000。

操作流程(順式轉(zhuǎn)染)：用opti-MEM分別稀釋RNA分子和Lipofectamine RNAiMAX，將兩者混合，室溫下孵育10-20分鐘。加入培養(yǎng)細(xì)胞中，在37°C孵育24-48小時(shí)。

Lipofectamine? RNAiMAX的價(jià)格約為：4315元/0.75 ml，7410元/1.5 ml。新推出的0.1 ml小包裝價(jià)格為738元。雖然目錄價(jià)看上去貴一些，但實(shí)際用量較省(24孔板的每孔建議用量為1 μl)，因此綜合來(lái)看性?xún)r(jià)比較高。

效率與溫和之間的佳平衡——Lipofectamine? LTX

對(duì)于某些對(duì)轉(zhuǎn)染試劑敏感的細(xì)胞系，L2K的毒性也是無(wú)法回避的問(wèn)題。于是，Invitrogen推出了毒性較低的Lipofectamine? LTX。這也意味著在獲得高轉(zhuǎn)染效率和高蛋白表達(dá)的同時(shí)，無(wú)需擔(dān)心轉(zhuǎn)染后細(xì)胞的活力。

當(dāng)然，轉(zhuǎn)染效率也是大家首要考量的因素，特別是在研究原代細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞和干細(xì)胞這些難對(duì)付的細(xì)胞時(shí)。當(dāng)然，Invitrogen也考慮到了。PLUS? 試劑就是一個(gè)秘密武器，讓大家在必要時(shí)候出手。Lipofectamine? LTX與PLUS? 試劑配合使用，可以完成難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞和原代細(xì)胞的成功轉(zhuǎn)染，包括人類(lèi)臍帶動(dòng)脈細(xì)胞(HUVEC)、RAW267.3 巨噬細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞及人類(lèi)間充質(zhì)干細(xì)胞。

轉(zhuǎn)染過(guò)程也非常簡(jiǎn)單，無(wú)需去除轉(zhuǎn)染復(fù)合物，也無(wú)需在轉(zhuǎn)染后更換培養(yǎng)基。只需將質(zhì)粒DNA、Lipofectamine? LTX及PLUS?試劑加入細(xì)胞中，24小時(shí)之后，即可分析基因表達(dá)情況。

當(dāng)然，還有一點(diǎn)需要特別注明，Lipofectamine? LTX試劑不能用于小分子RNA的轉(zhuǎn)染，這一點(diǎn)與L2K可不同。因此，在選擇質(zhì)粒與RNA的共轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，還須選擇L2K。

還有一個(gè)好消息!以往，Invitrogen的轉(zhuǎn)染試劑只有0.75 ml/1 ml的包裝。對(duì)于某些不經(jīng)常做轉(zhuǎn)染，或者只想試一下的客戶(hù)來(lái)說(shuō)，這個(gè)包裝太大了，于是他們便改投了Fugene的懷抱。Invitrogen當(dāng)然也意識(shí)到了這個(gè)問(wèn)題，不久前推出了0.1 ml的Lipofectamine? LTX & PLUS小包裝，價(jià)格約為528元。常規(guī)的1 ml包裝則為4800元。

如何對(duì)付百毒不侵的細(xì)胞——Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng)

就普通的細(xì)胞系而言，傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染試劑大多都能實(shí)現(xiàn)高效的轉(zhuǎn)染。然而，有些細(xì)胞“百毒不侵”，比如干細(xì)胞或原代細(xì)胞，你還真拿它沒(méi)辦法。無(wú)論怎么優(yōu)化，轉(zhuǎn)染試劑就是不靈。這時(shí)，不妨換個(gè)思路，試試電穿孔吧。

Life Technologies公司在2009年推出了一種新一代的電穿孔儀——Neon?轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。它可將核酸(包括質(zhì)粒DNA和siRNA)高效導(dǎo)入幾乎任意一種動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，包括難以轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞、干細(xì)胞和造血系統(tǒng)來(lái)源的細(xì)胞，同時(shí)保持高的細(xì)胞活性。

新穎的轉(zhuǎn)染室

大家可能注意到，Neon系統(tǒng)中沒(méi)有帶傳統(tǒng)的電轉(zhuǎn)杯。確實(shí)，這就是它的獨(dú)特之處。Neon系統(tǒng)用一個(gè)特殊的移液器吸頭取代了傳統(tǒng)的電轉(zhuǎn)杯。移液器吸頭內(nèi)使用24K鍍金電極，可形成更為均勻的電場(chǎng)，同時(shí)大限度地減少溫度升高和pH值變化幅度，在確保細(xì)胞高效轉(zhuǎn)染的同時(shí)，也更為溫和，保證細(xì)胞存活率更高。

裝有鍍金電極的Neon移液器吸頭(右)與普通電轉(zhuǎn)杯(左)的比較。研究表明，與普通電轉(zhuǎn)杯相比，狹長(zhǎng)形移液器吸頭可產(chǎn)生更為均勻的電場(chǎng)，從而提高細(xì)胞存活率和轉(zhuǎn)染效率。

高效轉(zhuǎn)染

實(shí)踐證明，Neon系統(tǒng)能夠?qū)Χ喾N難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行高效轉(zhuǎn)染，包括原代星形膠質(zhì)細(xì)胞、原代樹(shù)突狀細(xì)胞、Jurkat、小鼠胚胎干細(xì)胞等。多種細(xì)胞類(lèi)型可獲得超過(guò)75%的轉(zhuǎn)染效率。覺(jué)得摸索電轉(zhuǎn)條件無(wú)從下手?別擔(dān)心，在轉(zhuǎn)染前，你只需登錄Neon的網(wǎng)頁(yè)(www.invitrogen.com/neon)，就能找到細(xì)胞特異的實(shí)驗(yàn)條件，無(wú)需反復(fù)優(yōu)化，輕輕松松提高轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活性。另外Life Tech還有一個(gè)專(zhuān)門(mén)供Neon客戶(hù)分享他們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果及經(jīng)驗(yàn)的網(wǎng)站Neon Protocol Exchange(http://www.protocolexchange.com/index.jspa)，在這里有很多成功案例，供你參考。你也可以與大家分享你的成功案例。

設(shè)計(jì)靈活

有時(shí)，細(xì)胞很珍貴，若每次轉(zhuǎn)染所需的細(xì)胞量較少，那么你就能開(kāi)展更多更復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)。Neon系統(tǒng)帶有兩種吸頭：10 μl和100 μl，讓您可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求靈活選擇，而不像傳統(tǒng)電穿孔儀那樣只能轉(zhuǎn)染固定量的細(xì)胞。使用Neon系統(tǒng)，每次少可轉(zhuǎn)染2×104個(gè)細(xì)胞，多可轉(zhuǎn)染2×107個(gè)細(xì)胞。當(dāng)然，這并非**。若你的細(xì)胞更少或更多，也可一試，據(jù)Life Tech的專(zhuān)家介紹，有一位客戶(hù)曾成功轉(zhuǎn)染了5000個(gè)原代毛囊細(xì)胞。

使用簡(jiǎn)單

由于省掉了電轉(zhuǎn)杯，轉(zhuǎn)染過(guò)程也更為簡(jiǎn)化：只需將細(xì)胞和核酸吸入Neon移液器吸頭中，再插入到移液器吸頭架上，并按“Start”即可。轉(zhuǎn)染過(guò)后，直接將細(xì)胞加入培養(yǎng)容器中。既沒(méi)有繁瑣的移液，也不需要清洗電轉(zhuǎn)杯。而且，通用的試劑盒適用于所有細(xì)胞類(lèi)型，不用購(gòu)買(mǎi)多個(gè)試劑盒，也無(wú)需鑒定佳緩沖液。當(dāng)然，一次性使用的24K金電極吸頭成本不低。因多次使用會(huì)導(dǎo)致金包被變薄，改變吸頭的電導(dǎo)率，所以每個(gè)吸頭多只能使用兩次。

如何選擇轉(zhuǎn)染試劑?

如此多的產(chǎn)品可供選擇，當(dāng)然是好事，不過(guò)估計(jì)也有不少同學(xué)會(huì)頭疼，不知該選哪個(gè)好。生物幫特地找來(lái)了Life Technologies的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品選擇表，以饗讀者。

(生物幫bio1000.com)