如何捕獲低豐度蛋白（三）

明尼蘇達(dá)大學(xué)的Matthew Stone希望從唾液樣本中找到低豐度蛋白作為生物標(biāo)志物，用于口腔癌的早期檢測(cè)。

Stone希望從磷酸化蛋白入手，癌癥通常有著激酶級(jí)聯(lián)活性，因此一些磷酸化蛋白可能被認(rèn)為是**的生物標(biāo)志物。唾液的問題與其他體液一樣，蛋白豐度差異很大。唾液里有很多蛋白，除了大約20種很容易檢測(cè)的高豐度蛋白，研究人員更感興趣的低豐度蛋白卻很難檢測(cè)。

他當(dāng)時(shí)的同事Sricharan Bandhakavi建議他們使用Bio-Rad公司的Proteominer技術(shù)，來繞開動(dòng)態(tài)范圍的問題。于是，Matthew Stone與中山大學(xué)光華口腔醫(yī)院的陳小冰等人合作，開始利用Proteominer尋找他們想要的蛋白。他們的研究結(jié)果發(fā)表在今年4月的《Journal of Proteome Research》上。

他們總共鑒定出217個(gè)獨(dú)特的磷酸化肽段位點(diǎn)，代表了85個(gè)不同的磷酸化蛋白。他們已經(jīng)利用 Proteominer鑒定出唾液中的2340個(gè)蛋白，差不多將過去已知的唾液蛋白數(shù)翻了一倍。此外，研究小組還將唾液中的蛋白與血漿中的蛋白進(jìn)行了比較，并發(fā)現(xiàn)，在一些**中，唾液樣品中的蛋白標(biāo)志物比血漿要更容易找到。

Bandhakavi談到：“在發(fā)現(xiàn)一種生物狀態(tài)與另一種狀態(tài)有何不同時(shí)，Proteominer將非常有用。利用不同的樣本，比較生物學(xué)狀態(tài)，**狀態(tài)，如癌癥和健康的差異?！?/p>

ProteoMiner系統(tǒng)采用了組合的六肽文庫(kù)方法來富集低豐度蛋白，而不是傳統(tǒng)的**去除方法，這就大限度地減少了對(duì)已知抗體的依賴，并防止某些與高豐度蛋白相結(jié)合的低豐度蛋白質(zhì)的去除。

每個(gè)ProteoMiner珠子上都有不同的六肽配基，它們與某種蛋白具有特定的親和性。當(dāng)一個(gè)復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品與大量六肽配基共同孵育時(shí)，樣品中的蛋白質(zhì)會(huì)相應(yīng)地找到其結(jié)合位點(diǎn)而被珠子捕獲。由于珠子的結(jié)合能力有限，高豐度蛋白迅速飽和了相應(yīng)配基，而多余的蛋白就被洗掉。與此相反，低豐度蛋白通過與特定配基的結(jié)合而富集。通過這種方式，低豐度蛋白質(zhì)相對(duì)得到了富集與濃縮。隨著越來越多新技術(shù)和新產(chǎn)品的出現(xiàn)，相信研究人員能夠從**的低豐度蛋白中提煉出更多有助于**診斷和**的信息。