預(yù)制膠——輕松應(yīng)對(duì)蛋白電泳

現(xiàn)在，聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)實(shí)驗(yàn)了。不過(guò)可別小看了這個(gè)實(shí)驗(yàn)，它比核酸電泳可復(fù)雜多了，需要準(zhǔn)備的試劑多，耗時(shí)也長(zhǎng)，而且每一次跑出來(lái)結(jié)果可能都不一樣。有時(shí)只是為了補(bǔ)一張漂亮的電泳圖片，卻花了好幾天時(shí)間，橫 豎還是不滿意。這時(shí)，你就可以考慮一下預(yù)制膠了。

蛋白專家Pierce公司推出了與多種電泳槽兼容的Precise Protein Gel預(yù)制膠。Precise Protein Gel是pH值中性的，蛋白不易降解，完整性好，而凝膠也穩(wěn)定易保存，保質(zhì)期可達(dá)12個(gè)月以上。同時(shí)，配合Tris-HEPES-SDS緩沖液，分辨率更高，且電泳速度更快，只需45分鐘就可以完成電泳。重要的是，Precise Protein Gel可以與多種電泳槽相兼容，包括實(shí)驗(yàn)室中普遍的Bio- Rad Mini-PROTEAN 3、invitrogen的Novex XCell II Surelock?和Hoefer等電泳槽，這樣你就不用為了幾盒膠而特地去買一個(gè)槽了，而且說(shuō)明 書也很貼心，針對(duì)不同的電泳槽都有詳細(xì)的步驟和圖示。

目前有兩種梯度濃度(8-16%、4-20%)和三種固定濃度(8%、10%、12%)可供選擇，規(guī)格是常用的10孔、12孔和15 孔。10孔的上樣量達(dá)50ul，幾乎是其他預(yù)制膠的兩倍。蛋白分離范圍請(qǐng)看下表，大部分蛋白都可以得到很好分離，但是如果蛋白特別大或特別小，估計(jì)就不適用了。目錄價(jià)是1526元(10塊)，有點(diǎn)小貴，不過(guò)6月10日前有促銷，買一送一，相當(dāng)于每塊76.3元。

Invitrogen早在2005年就開始大力推廣NuPAGE預(yù)制膠，雖說(shuō)當(dāng)時(shí)的價(jià)格確實(shí)比較高，但也有不少用 戶在試用了之后，覺(jué)得效果好又方便，還是忍痛買了?，F(xiàn)在膠的價(jià)格降了2/3，也算是一個(gè)福音吧。NuPAGE膠**的中性pH 和緩沖系統(tǒng)使凝膠 非常穩(wěn)定(12個(gè)月的保質(zhì)期)，而且配合NuPAGE Antioxidant一起使用，使蛋白不易降解和氧化，提供了佳的條帶分辨率，減少了蛋白的修飾，改善了western blot 的分析結(jié)果;電泳時(shí)間只需要35分鐘，非常省時(shí)。很多用戶使用后反映條帶確實(shí)很sharp，比自己配膠可強(qiáng)多了。

Nupage膠分為兩種：NuPAGE Bis-Tris Gel(適合中等大小或小蛋白，2.5-200 kDa)和NuPAGE Tris-Acetate Gel(尤其適用于大蛋白，30-400 kDa)。目前有五種濃度(10%、12%、4-12%、7%、3-8%)、兩種厚度(1.0mm和1.5mm)以及不同孔數(shù)可供選擇，總有一款合你心水?，F(xiàn)在的促銷價(jià)是每盒(10塊)576元，比較實(shí)惠，不過(guò)就是與其他電泳槽不兼容，還要再花1980元買一個(gè)Novex XCell II Surelock?電泳槽。相關(guān)的緩沖液都有配方提供，可以選擇自己配，除了NuPage Antioxidant，不過(guò)如果你的蛋白不易被氧化的話，也可以選擇不加。

說(shuō)起跑膠，怎么能忘了Bio-Rad呢?在實(shí)驗(yàn)室里放眼望去，幾乎全是Bio-Rad的電泳槽。不過(guò)大部分用戶都是自己配膠 ，可能還不知道Bio-Rad也有預(yù)制膠。Bio-Rad有多種規(guī)格、濃度和成分的預(yù)制膠，配合不同的電泳系統(tǒng)。平時(shí)實(shí)驗(yàn)室里常用的是Mini- PROTEAN 3電泳槽，所以這里就介紹與之配套的Ready Gel預(yù)制膠。用于聚丙烯酰胺凝膠電泳的Ready Gel有兩種：Tris-HCl Gel和Tris-Tricine Gel，Tris-HCl Gel主要用于SDS-PAGE和非變性的Native PAGE;Tris-Tricine Gel則用于分離肽段。

因?yàn)槭菈A性環(huán)境(pH 8.8)，膠易降解，所以只能保存12周(除去訂貨和路上的時(shí)間，到手估計(jì)只有4周了)。有多種濃度和孔數(shù)供選擇，蛋白分離范圍請(qǐng)看下表。Ready Gel可以分離小至1 kDa的蛋白，不過(guò)對(duì)于250 kDa以上的蛋白，就無(wú)能為力了。它是一塊一塊單獨(dú)售賣的，每塊的價(jià)格在130左右，偏貴，不過(guò)偶爾買一塊來(lái)跑個(gè)漂亮的電泳圖，用來(lái)發(fā)paper，還是可以接受的。

綜上，我們將三家公司的預(yù)制膠做了一個(gè)比較。大家可以根據(jù)目的蛋白的大小、實(shí)驗(yàn)室的配置來(lái)選擇合適的預(yù)制膠。預(yù)制膠因?yàn)槭谴笠?guī)模生產(chǎn)的，所以膠與膠之間重復(fù)性好，不像手工灌膠那樣結(jié)果差異大。且即開即用，不用再配制N種溶液、灌膠、等膠凝固，節(jié)省了寶貴的時(shí)間。另外，現(xiàn)在的中性凝膠保質(zhì)期長(zhǎng)，分辨率高，這些都成為我們改用預(yù)制膠的理由。但是，價(jià)格卻限制了它的大規(guī)模使用。如果有的實(shí)驗(yàn)室只是偶爾跑幾次膠，或是進(jìn)行重要的實(shí)驗(yàn)，還是不妨一試吧，畢竟，它能讓你從繁重的實(shí)驗(yàn)和不確定的結(jié)果中解放出來(lái)。